экспериментальная медицина
тезисы
тезисы
Противовирусный эффект in vitro метаболитов, выделяемых культурами энтерококка и лактобацилл
Авторы А. Н. Суворов, В. А. Фураева, Е. И. Ермоленко
Время проведения 2003 год
Опубликовано Тезисы VI Российсого съезда врачей-инфекционистов, Санкт-Петербург, 29−31 октября 2003, с. 371
В настоящее время пробиотики успешно используются для лечения вирусных инфекций. Однако, механизм их действия изучен недостаточно. Ранее нами было показано, что супернатанты Lactobacillus GG, L.plantarum 8АРЗ, Enterococcus faecium L3, Е.coli M17 обладают различной противовирусной активностью.
Все препараты, кроме полученного из эшерихий, вызывали существенное подавление цитопатического действия (ЦПД) вируса простого герпеса (ВПГ). Максимальный эффект обнаружен у энтерококка. Этот штамм, наряду со штаммом лактобацилл из международной коллекции мы избрали в качестве основных объектов исследования.
Все препараты, кроме полученного из эшерихий, вызывали существенное подавление цитопатического действия (ЦПД) вируса простого герпеса (ВПГ). Максимальный эффект обнаружен у энтерококка. Этот штамм, наряду со штаммом лактобацилл из международной коллекции мы избрали в качестве основных объектов исследования.
Целью данной работы явилось изучение противовирусного действия супернатантов энтеро-кокков и лактобацилл, добавленных в культуру клеток в различное время до и после заражения ВПГ1.
Для получения супернатантов культуры Enterococcus faecium L3 («Ламинолакт» ООО «Авена») и Lactobacillus GG АТСС 53103 («Culturelle» U.S.А.) выращивали в жидкой питательной среде в течение 24 часов, после центрифугирования, к осадкам добавляли культуральную среду DMEM и инкубировали дополнительно 3,5 час, после чего фильтровали через миллипоровские фильтра (ф 22).
Количество энтерококков и лактобацилл в 1 мл DMEM составляло соответственно 9,23 и 9,51 lg КОЕ, вес сухих осадков 0,4 г и 0,7 г. Супернатанты в разведении 1:2 — 1:20 вносили в культуру клеток Vero одномоментно, за 24 часа, за 90 мин до и через 90 мин после заражения культуры клеток ВПГ1 (Ленинград) 248/88. После внесения вируса в количестве 102−103 инфекционных доз (ИД) пробы культивировали в течение 48−72 часа.
Инфекционность и ЦПД вируса оценивали с использованием светового инвертированного микроскопа и иммунофлюоресцентного метода, окрашивая препараты поликлональной сывороткой против ВПГ1.
Показано, что максимальное разведение супернатантов, обладающих противовирусной активностью и не оказывающее токсическое действие на клетки, было одинаковым.(1:5) для LGG и LЗ. Вне зависимости от схемы эксперимента, внесение препарата (в разведении1:5) в клеточную культуры одномоментно, за 90 минут до и после заражения культуры клеток ВПГ1, супернатант L3 вызывал подавление ЦПД вируса до 25 %, супернатант LGG до 50%, по сравнению с контролем где наблюдалось 100% поражение клеток.
Предобработка культуры клеток препаратами из энтерококков и лактобацилл в течение 24 часов вызывала значительно большее подавление ЦПД (соответственно до 10% и 25%). Использование различных разведений вируса показало, что продукты, выделяемые L3 снижают его инфекционную активность в 10−100 раз. Супернатант LGG не влиял на инфекционность ВПГ1.
Количество энтерококков и лактобацилл в 1 мл DMEM составляло соответственно 9,23 и 9,51 lg КОЕ, вес сухих осадков 0,4 г и 0,7 г. Супернатанты в разведении 1:2 — 1:20 вносили в культуру клеток Vero одномоментно, за 24 часа, за 90 мин до и через 90 мин после заражения культуры клеток ВПГ1 (Ленинград) 248/88. После внесения вируса в количестве 102−103 инфекционных доз (ИД) пробы культивировали в течение 48−72 часа.
Инфекционность и ЦПД вируса оценивали с использованием светового инвертированного микроскопа и иммунофлюоресцентного метода, окрашивая препараты поликлональной сывороткой против ВПГ1.
Показано, что максимальное разведение супернатантов, обладающих противовирусной активностью и не оказывающее токсическое действие на клетки, было одинаковым.(1:5) для LGG и LЗ. Вне зависимости от схемы эксперимента, внесение препарата (в разведении1:5) в клеточную культуры одномоментно, за 90 минут до и после заражения культуры клеток ВПГ1, супернатант L3 вызывал подавление ЦПД вируса до 25 %, супернатант LGG до 50%, по сравнению с контролем где наблюдалось 100% поражение клеток.
Предобработка культуры клеток препаратами из энтерококков и лактобацилл в течение 24 часов вызывала значительно большее подавление ЦПД (соответственно до 10% и 25%). Использование различных разведений вируса показало, что продукты, выделяемые L3 снижают его инфекционную активность в 10−100 раз. Супернатант LGG не влиял на инфекционность ВПГ1.
Таким образом, предложен новый способ оценки противовирусной активности микроорганизмов, благодаря которому удалось показать, что продукты, выделяемые Enterococcus faecium L3 обладают более активным действием на данный штамм ВПГ1 по сравнению с метаболитами LGG.
Нельзя исключить, что супернатанты лактобацилл и энтерококка содержат компоненты, оказывающие на ВПГ1 как прямое (вирулицидное или вирусостатическое), так и опосредованное действие за счет появления противовирусной активности фибробластов.